Возбудитель дифтерии

Corynebacterium diphteriae- грамположительные бактерии палочковидной формы, на концах которых находятся зерна волютина (запасы питательных веществ).

Культуральные свойства: микроб очень капризный, на простых средах не растет. Необходима кровь или сыворотка крови.

Диагностика: бактериоскопический и бактериологический методы.

Материал для исследования: слизь или отделяемое пораженного органа (носа, носоглотки зева).

Бактериоскопический: приготовление мазка с последующей окраской по Нейсеру и микроскопированием. Для этого метода окраски используются два красителя: везувин и уксуснокислая синька Нейсера. Механизм окраски: окрашивание идет по типу химической реакции кислота + щелочь. Зерна волютина представляют собой соединения, имеющие щелочную реакцию. Поэтому избирательно окрашиваются уксуснокислой синькой Нейсера в синий цвет. Цитоплазма клетки обладает кислой реакцией, поэтому воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желто-коричневый цвет.



Но с помощью бактериоскопического метода диагноз поставить нельзя, т.к. он является ориентировочным. Если культура молодая, с бурно протекающими процессами, то зерен волютина может и не быть, их можно увидеть у зрелых культур. Поэтому ведущим методом будет бактериологический, его этапы следующие:

I. Выделение чистой культуры. Исследуемый материал сеют на среду Клауберга (МПА + кровь = кровяной МПА), кроме крови добавляется теллурит калия. Колонии будут черного цвета за счет восстановления теллурита калия в теллур калия в результате роста дифтерийной палочки.

II. Идентификация выделенной культуры. Дать ответ на 3 вопроса:

1. Род – Corynebacterium. В этот род входят представители нормальной микрофлоры, которые к заболеванию отношения не имеют, очень похожи на истинные дифтерийные палочки и при посеве на среду Клауберга дают черные колонии: ложная дифтерийная палочка (Гофмана), дифтероиды. Поэтому их необходимо отличить от истинной палочки.

Биохимические свойства: истинная дифтерийная палочка имеет фермент – цистиназа. У остальных присутствует фермент уреаза (ферментирует мочевую кислоту). Определяют эти ферменты.

Морфология: представители нормальной микрофлоры – располагаются в виде «частокола», зерна волютина расположены хаотично.

2. 2 биовара: gravis (более агрессивный) и mitis. Их отличия:

-по культуральным свойствам: gravis – R-форма колоний (шероховатые, с неровными краями, напоминают цветок маргаритки), mitis – S-форма (гладкие, блестящие, ровные края)

- по биохимическим свойствам: gravis ферментирует крахмал, mitis – нет.

3. Главный фактор патогенности – экзотоксин (клиника, патогенез, лечение и профилактика – все завязано на нем). Истинная дифтерийная палочка бывает токсигенной (выделяет экзотоксин) и нетоксигенной.

После того, как выделили культуру дифтерийной палочки, необходимо проверить, выделяет она токсин или нет с помощью реакции преципитации в геле. Для этой реакции необходимо:

1) исследуемые культуры дифтерийных бактерий

2) контрольные токсигенные культуры дифтерийных бактерий.

3) антитоксическая дифтерийная сыворотка (антитела)

4) стерильная полоска фильтровальной бумаги

5) чашки Петри со специальной питательной средой.

Полоску фильтровальной бумаги смачивают противодифтерийной сывороткой и накладывают на агар по диаметру чашки. Вдоль полоски делают посевы, чередуя исследуемую культуру и контрольную токсигенную. Чашку инкубируют 24 часа и затем отмечают наличие линии преципитации (те места, где встретятся соответствующие друг другу антигены и антитела).

Лечение: антитоксическая противодифтерийная сыворотка, антибиотики, сульфаниламидные препараты.

Профилактика: вакцины, содержащие дифтерийный анатоксин: АКДС (адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина), адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин (АДС), адсорбированный дифтерийно-столбнячный анатоксин с уменьшенным содержанием компонентов (АДС-М) и их зарубежные аналоги, а также АД-М.